SDS PAGE – Pengertian & Cara Kerjanya

SDS PAGE – Pengertian & Cara Kerjanya

SDS-PAGE – adalah singkatan dari Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis. Ini adalah salah satu teknik pemisahan elektroforesis yang digunakan dalam biokimia dan biologi molekuler untuk memisahkan molekul-molekul berdasarkan berat molekulnya. Teknik ini sering digunakan untuk memisahkan protein-protein dalam sampel berdasarkan ukuran molekulnya.

Berikut adalah beberapa komponen dan langkah-langkah utama dalam SDS-PAGE:

1. SDS (Sodium Dodecyl Sulfate): SDS adalah deterjen anionik yang digunakan dalam teknik ini. SDS menggantikan struktur tiga dimensi protein dengan muatan negatif seragam sehingga membuat semua protein memiliki muatan negatif dalam proporsi yang hampir sama berdasarkan berat molekulnya.
2. Polyacrylamide Gel: Gel ini terbuat dari polimer polyacrylamide dan berfungsi sebagai medium pemisahan. Gel ini memiliki struktur jaringan pori-pori yang berbeda-beda tergantung pada konsentrasi acrylamide yang digunakan, yang memungkinkan pemisahan molekul berdasarkan ukuran.
3. Stacking Gel dan Resolving Gel: Gel ini terdiri dari dua bagian utama, yaitu stacking gel dan resolving gel. Stacking gel digunakan untuk mengkonsentrasi sampel protein dalam satu titik sehingga protein-protein tersebut bergerak bersamaan ke dalam resolving gel. Resolving gel adalah bagian utama tempat pemisahan berdasarkan ukuran molekul terjadi.
4. Electrophoresis: Sampel protein yang telah dicampur dengan SDS dimuat ke dalam gel. Kemudian, gel ditempatkan dalam elektroforesis vertikal, dan arus listrik diterapkan. Karena muatan negatif yang seragam yang diberikan oleh SDS, protein-protein bergerak ke anoda (elektroda positif) berdasarkan berat molekulnya. Protein dengan berat molekul lebih kecil bergerak lebih cepat dan mencapai bagian bawah gel lebih dulu.
5. Staining: Setelah elektroforesis selesai, gel diwarnai dengan pewarna, seperti Coomassie Blue, untuk mengvisualisasikan protein-protein yang telah dipisahkan. Pewarna ini berinteraksi dengan protein sehingga protein-protein tersebut menjadi terlihat sebagai bercak pada gel.
6. Analisis: Setelah pewarnaan, gel dipindai atau difotografi untuk mendapatkan gambaran tentang pemisahan protein-protein dalam sampel. Ukuran berat molekul protein yang tidak diketahui dapat diestimasi dengan membandingkannya dengan protein-marker yang diketahui berat molekulnya.

SDS-PAGE adalah teknik yang penting dalam analisis protein dalam penelitian biokimia, biologi molekuler, diagnostik medis, dan berbagai aplikasi lainnya. Ini memungkinkan pemisahan protein dalam sampel berdasarkan ukuran molekul, yang dapat memberikan wawasan penting tentang komposisi dan karakteristik protein dalam sistem biologis yang sedang diteliti.